TEST ELISA LÀ GÌ

     

ELISA là một trong kỹ thuật được sử dụng đa phần trong miễn kháng học, ứng dụng rộng thoải mái trong những ngành y học, thực phẩm, nông nghiệp,… vào y học, nghệ thuật ELISA được ứng dụng trong số xét nghiệm HIV, những bệnh viêm gan siêu vi hay những bệnh lý nhiễm ký kết sinh trùng,…

1.Nguyên lý chuyên môn ELISA

ELISA (Enzyme-linked Immunosorbent assay) là một cách thức sinh hoá sử dụng đa phần trong miễn kháng học để phát hiện sự hiện diện của một phòng thể hoặc chống nguyên vào một mẫu.

Bạn đang xem: Test elisa là gì

*

Hình 1: nguyên lý ELISA

Nguyên lý của nghệ thuật ELISA là nhờ vào tính quánh hiệu kháng nguyên - kháng thể với được thực hiện bằng những bước cơ bản sau: chống nguyên - antigen (KN) hoặc chống thể - antibody (KT) đã biết được gắn trên một giá thể rắn, kế tiếp cho mẫu có chứa chống thể - antibody (KT) hoặc chống nguyên (KN) đề xuất tìm vào giếng. Bổ sung thêm phòng thể gồm gắn cùng với ezyme. Bước sau cuối thêm cơ chất (substance), enzyme sẽ thay đổi cơ chất này và tạo biểu hiện màu rất có thể xác định được sử dụng máy đo huỳnh quang.

2. Các phương pháp ELISA

ELISA trực tiếp (direct ELISA):

Phương pháp này thường thực hiện trong ELISA định tính, ít cần sử dụng trong định lượng. Phương thức này có ưu thế là chỉ việc một lần ủ vì vậy tiết kiệm thời gian và về tối thiểu được việc kiểm soát điều hành các điều kiện trong quy trình thực hiện tại (thay đổi ánh sáng và buffer cho mỗi lần ủ, tính thời gian…). Tuy nhiên, nhược điểm của chính nó là nhuộm màu nền (background staining) cao vì sự links không sệt hiệu của chống thể với mặt phẳng rắn và các protein cố định và thắt chặt trên mặt phẳng rắn. Việc ghi lại từng nhiều loại kháng thể sử dụng cho từng kháng nguyên cũng tương đối tốn kém, nhất là lúc phải chẩn đoán một số trong những lượng lớn các loại phòng nguyên khác nhau.

ELISA gián tiếp (indirect ELISA):

Ưu điểm của phương pháp này là độ nhạy cảm cao chỉ cần tạo một loại kháng kháng thể sở hữu enzyme để nhận ra cho nhiều kháng nguyên khác nhau. Tuy vậy nhược điểm của nó là tăng số bước triển khai do đó làm tăng việc kiểm soát điều hành các điều kiện, quá trình thực hiện tại xét nghiệm và kéo dài thời gian chẩn đoán.

ELISA sandwich:

Phương pháp này có nhiều ưu điểm quá trội, đầu tiên là độ nhạy cảm cao bớt được nhuộm color nền và các phản ứng không đặc hiệu vày đã sa thải được phần lớn các yếu tắc tạp, phản bội ứng được thực hiện thuận tiện hơn.

*

Hình 2: Các phương pháp kỹ thuật ELISA

ELISA tuyên chiến và cạnh tranh (competitive ELISA)

ELISA đối đầu và cạnh tranh là phương thức ELISA rất tác dụng cho định lượng những yếu tố hiện diện trong chủng loại với lượng nhỏ. ELISA cạnh tranh sử dụng một lượng chống nguyên cùng loại với phòng nguyên mà lại ta ước ao định lượng trong mẫu mã (kháng nguyên cạnh tranh) mang lại phản ứng miễn dịch với một loại kháng thể quánh hiệu cố định trên mặt rắn, kế tiếp đo lượng kháng nguyên đối đầu và cạnh tranh này thông qua hoạt tính enzyme được links với nó. Kháng nguyên đối đầu và cạnh tranh càng hiện diện nhiều cho biết loại kháng nguyên đó trong mẫu mã càng ít với ngược lại.

3. đa số điều cần lưu ý khi tiến hành kỹ thuật ELISA

Do kỹ thuật ELISA là nghệ thuật miễn dịch bán tự động nên kết quả xét nghiệm đang bị ảnh hưởng nhiều bởi các yếu tố như: nhỏ người, chính sách thao tác, hóa chất, thứ phân tích. Để cai quản chất lượng tốt các chuyên môn xét nghiệm ELISA yêu cầu phải thực hiện đúng theo quá trình của mỗi loại xét nghiệm.

3.1. Khí cụ và hóa chất

- Ống nghiệm.

- giá đựng ống nghiệm.

- Micropipette có các thể tích khác nhau từ 1^l đến 1000^l.

- Đầu type nhựa tích hợp Micropipette.

- Giấy thấm.

- đồ vật rửa giếng ELISA.

- thứ đọc ELISA.

- bộ hóa chất tất cả có:

+ các thanh nhựa đang gắn phòng nguyên/kháng thể + hỗn hợp rửa.

+ Calibration + triệu chứng âm + triệu chứng dương.

+ cùng hợp.

+ Cơ chất.

+ hỗn hợp pha loãng huyết thanh.

+ hóa học ngưng làm phản ứng.

3.2. Mẫu dịch phẩm

+ thực hiện mẫu máu tĩnh mạch được bỏ vào vào ống nghiệm sạch sẽ không chứa chất kháng đông hoặc bao gồm chứa chất chống đông (Heparin/EDTA) tùy thuộc vào yêu ước từng nhiều loại xét nghiệm.

+ Mỗi chủng loại máu sẽ được để vào những ống nghiệm riêng lẻ có dán mã Barcode cùng tên tuổi đầy đủ, có nắp vặn kín.

+ các mẫu huyết được bỏ vào hộp kín vận chuyển về chống xét nghiệm trong thời hạn sớm nhất.

Xem thêm: Lá Dứa Có Công Dụng Gì - Cách Sử Dụng Lá Dứa Thơm Tốt Sức Khỏe, Sắc Đẹp

+ thường thì các mẫu máu để làm các xét nghiệm ELISA sẽ định hình trong 12h ở nhiệt độ phòng từ 20 - 25 ºC, ánh nắng mặt trời 2 - 8 ºC bình ổn trong 24 - 48h.

+ Tại phòng xét nghiệm những mẫu máu sẽ được phân phối về khu vực thực hiện tại từng xét nghiệm riêng cùng mã hóa số mẫu mã theo từng dịch vụ thương mại xét nghiệm để tránh việc lây nhiễm chéo cánh hoặc nhầm lẫn mẫu dịch phẩm.

3.3. Làm chủ chất lượng

Kỹ thuật ELISA là kỹ thuật miễn dịch bán auto cho phải việc thống trị chất lượng trong quy trình làm xét nghiệm đóng góp một vai trò vô cùng quan trọng. Quan trọng phải đưa ra gần như quy trình kiểm soát chất lượng ngặt nghèo tại từng bước một thực hiện:

+ Trước xét nghiệm: Mẫu bệnh dịch phẩm đề nghị đạt yêu mong không được vỡ lẽ hồng cầu, không nhiễm khuẩn, độ đậm đặc mỡ ngày tiết cao cũng ảnh hưởng đến công dụng xét nghiệm.

+ vào xét nghiệm: thực hiện Calibration và Control trong mỗi lần thực hiện mẫu theo như đúng yêu ước của từng bộ kít xét nghiệm.

+ Sau xét nghiệm: công dụng mẫu bệnh nhân chỉ được gật đầu khi đường Calibration và Control trong cùng một lần tiến hành đạt công dụng tốt. Tác dụng sau khi tiến hành phân tích ngừng nên thực hiện các phần mềm ghi nhận kết quả trực tiếp, kiêng ghi thủ công bằng tay gây không nên số hiệu quả do nhầm lẫn khi vào sổ.

3.4. Các bước kỹ thuật

Thực hiện theo như đúng hướng dẫn ở trong nhà sản xuất.

Quy trình gồm quá trình chính sau đây:

Bước 1: mang đến mẫu bệnh dịch nhân, hội chứng âm, bệnh dương vào giếng nhựa đã gắn sẵn kháng nguyên/kháng thể. Ủ ở nhiệt độ phòng hoặc 37 ºC, thời hạn ủ theo hướng dẫn của phòng sản xuất.

Bước 2: Rửa những giếng bởi dung dịch đệm PBS - Tween 20, thấm giấy cho ráo nước.

Bước 3: cho cộng hòa hợp vào mỗi giếng, ủ ở nhiệt độ phòng hoặc 37 ºC, thời hạn ủ theo hướng dẫn của nhà sản xuất.

Bước 4: Rửa những giếng bởi dung dịch đệm PBS - Tween 20, thấm giấy cho ráo nước.

Bước 5: mang lại cơ chất vào từng giếng, đợi chờ cho màu xuất hiện (15 - 30 phút).

Bước 6: đến dung dịch ngưng phản bội ứng.

Bước 7: Đọc tác dụng bằng thứ đọc ELISA tự động

*

Hình 3: phản ứng ELISA sandwich

Tóm lại trong mỗi bước của các bước kỹ thuật ELISA đều phải có khả năng ảnh hưởng đến kết quả xét nghiệm ví như như người kỹ thuật viên triển khai không làm cho đúng theo các bước đã xây dựng. Những yếu tố nguy cơ tiềm ẩn hay gặp có thể dẫn cho sai số công dụng là:

+ hóa chất không để định hình ở nhiệt độ phòng trước khi làm xét nghiệm.

+ Hút không đúng thể tích chủng loại pha loãng, sai thể tích dung dịch thử.

+ thời hạn ủ và ánh sáng không đúng: gây âm tính hoặc dương tính giả.

+ Rửa ko sạch: nên sử dụng máy rửa tự động hóa để bảo đảm đủ thể tích nước rửa và số lần rửa, không thấm khô khay mẫu sau khi rửa xong.

+ ko đọc hiệu quả ngay sau khoản thời gian dừng làm phản ứng.

3.5. Biện luận kết quả

- Ngưỡng dương tính hoàn toàn có thể khác nhau đối với từng các loại xét nghiệm. Biện luận hiệu quả dựa trên ngưỡng dương tính vị nhà cung ứng đưa ra.

- những kỹ thuật miễn kháng phát hiện chống thể cho tác dụng gián tiếp, không tồn tại giá trị giỏi đối.

- tác dụng âm tính cũng không thải trừ hoàn toàn không nhiễm bệnh, có thể do new bị nhiễm, hoặc bị truyền nhiễm quá lâu, hoặc lượng chống nguyên/kháng thể quá ít để có thể phát hiện được bằng phương thức ELISA. Trong trường hợp nghi vấn mắc dịch trên lâm sàng yêu cầu làm lại xét nghiệm sau 1-2 tuần. Xét nghiệm vài ba lần để theo dõi dịch chuyển của chống thể/ chống nguyên có giá trị rộng là xét nghiệm một lần. Nếu cần, nên kiểm tra lại bằng những kỹ thuật khác.

- hiệu quả dương tính cũng ko khẳng định hoàn toàn vì rất có thể dương tính giả vì chưng phản ứng chéo giữa những loại ký sinh trùng hoặc căn nguyên gây bệnh.

Vì vậy, các phản ứng miễn dịch tìm kháng nguyên/kháng thể ko thể vắt thế trọn vẹn xét nghiệm trực tiếp vào chẩn đoán lý do bệnh. Kết quả xét nghiệm, dù âm xuất xắc dương, cũng rất cần phải xem xét một giải pháp cẩn thận, kết phù hợp với các nhân tố dịch tễ hoặc những xét nghiệm bổ sung khác (sinh học tập phân tử, nuôi ghép tế bào…) và những cung ứng phi lâm sàng không giống (XQ, hết sức âm…).

Xem thêm: Cách Khôi Phục Bài Đã Xóa Trên Facebook Siêu Đơn Giản, Cách Khôi Phục Tin Đã Xóa Trên Facebook

Với nhóm ngũ chăm gia, bác bỏ sĩ giàu ghê nghiệm, hệ thống máy móc hiện nay đại cũng giống như quy trình cai quản chất lượng chặt chẽ (theo tiêu chuẩn ISO 15189:2012), kỹ thuật ELISA được tiến hành tại bệnh viện Đa khoa tanquockhang.vn luôn bảo vệ kết trái xét nghiệm mau chóng nhất, chính xác nhất. Mọi thắc mắc xin liên hệ tổng đài 1900 565656 nhằm được tư vấn và giải đáp.